circCSPP1通过吸附miR-431上调ZEB1的表达促进结直肠癌侵袭转移

摘要

目的研究ZEB1与circCSPP1及miR-431的相关性,探讨circCSPP1通过吸附miR-431上调ZEB1的表达进而促进结直肠癌侵袭转移。方法通过TargetScan、miRDB和mirWalk等三个数据库,探索结直肠癌细胞中ZEB1是否为miR-431的潜在靶点;在SW620和LOVO两组细胞株中,通过质粒转染构建过表达miR-431组(miR-431 mimic)和对照组(mimic control)、敲低miR-431组(inhibitor)和对照组(inhibitor control)等四组细胞,用RT-qPCR和Western blot分别检测各组细胞ZEB1的mRNA和蛋白表达水平。通过RIP实验研究Ago2结合ZEB1和miR-431的相对富集含量,探索miR-431与ZEB1是否存在相关作用关系。在SW620和LOVO两组细胞株中,通过质粒转染构建control组、circCSPP1+mimic control、circCSPP1+miR-431 mimic、circCSPP1+sh-nc和circCSPP1+sh-ZEB1等五组细胞,用RT-qPCR分别检测各组细胞ZEB1的mRNA表达水平;通过Transwell实验分别检测各组细胞ZEB1的侵袭和迁移能力。用Western blot检测细胞Snail、E-cadherin等EMT相关蛋白的水平。结果基于三个数据库,发现ZEB1、SMAD4、DAAM1、CDK14和ROCK1可能是miR-431的潜在靶点,且ZEB1可被miR-431下调;在SW620和LOVO两组细胞株中,miR-431可明显促进结直肠癌细胞ZEB1 mRNA和蛋白的表达。miR-431可能与ZEB1直接结合Ago2蛋白,并通过Ago2蛋白抑制miR-431。过表达circCSPP1可明显促进ZEB1的表达,但过表达miR-431或敲低ZEB1可逆转circCSPP1对ZEB1的促进作用;circCSPP1可促进结直肠细胞的侵袭和迁移,但过表达miR-431或敲低ZEB1可逆转此作用。过表达circCSPP1明显促进ZEB1和Snail的表达,降低E-cadherin的表达,但过表达miR-431或敲低ZEB1可逆转circCSPP1对上述蛋白的作用。结论ZEB1是结直肠细胞中miR-431的靶基因,且miR-431可抑制ZEB1的表达。circCSPP1可吸附miR-431上调ZEB1的表达进而促进结直肠癌细胞的侵袭和迁移。circCSPP1可通过调节miR-431/ZEB1通路促进结直肠癌的恶性进展。