circCSPP1通过吸附miR-431促进结直肠癌增殖转移

摘要

目的 探讨环状RNA circCSPP1通过吸附miR-431而促进结直肠癌增殖和转移的作用及其机制.方法 通过生物信息学方法分析circCSPP1在人结直肠癌组织中的表达;实时定量PCR法检测结直肠癌临床样本中circCSPP1的表达;以结肠癌细胞株SW620和LOVO为研究对象,MTT检测circCSPP1对细胞增殖活性的影响;克隆形成实验探究circCSPP1对结直肠癌细胞克隆形成的效应;Transwell实验检测circCSPP1在肿瘤细胞迁移/侵袭中的作用;生物信息学方法预测circCSPP1可能的miRNA结合位点,通过双荧光素酶实验验证cricCSPP1与miR-431之间的联系,敲减和过表达circCSPP1后检测miR-431的表达,验证二者的相关性;荧光原位杂交实验验证circCSPP1与miR-431在胞浆中共表达,分析miR-431表达与结直肠癌临床特征的关系.结果 生物信息学分析表明circCSPP1在结直肠癌组织中高表达,这一现象在临床样本中得到证实;MTT实验结果表明,circCSPP1受到抑制后,结直肠癌细胞的增殖活性下降;克隆形成实验的结果提示沉默circCSPP1可以减少结直肠癌细胞的克隆.Transwell迁移实验中,抑制circCSPP1可以降低肿瘤细胞的迁移率.Transwell侵袭实验表明,结直肠癌细胞株的circCSPP1受到抑制后,侵袭率显著下降.在探究circCSPP1影响癌细胞的机制时,对预测的5种miRNA逐一验证,发现miR-431的荧光素酶活性降低,表明cricCSPP1与miR-431之间存在结合位点.通过正反验证,敲减circCSPP1后,细胞中miR-431水平升高,过表达circCSPP1后,miR-431表达水平降低.FISH实验中,circCSPP1及miR-431均被证实主要存在于胞浆中.结论 circCSPP1在结直肠癌组织中显著高表达;circCSPP1正向调控结直肠癌的进展.circCSPP1通过海绵样吸附作用抑制了相关细胞中的miR-431表达水平,并最终影响结直肠癌患者的生存及预后.