三七皂甙对造血细胞GATA-1和GATA-2转录调控蛋白的诱导作用

摘要

目的观察三七总皂甙(PNS)对锌指结构GATA族转录调控蛋白的诱导作用,探讨PNS在造血细胞内的信号传递途径.方法选择恰当浓度的PNS作用于正常人骨髓单个核细胞、HL-60、K562、CHRF-288和Meg-01细胞,2周后提取核蛋白,用GATA-1和GATA-2抗体行Western印迹杂交,检测GATA-1和GATA-2的表达情况.用32P标记的GATA双链寡核苷酸探针行电泳带移动阻滞试验(EMSA)和抗体胶移动实验,检测GATA-DNA复合物及亚型.结果 PNS能够促进人骨髓红系、粒系祖细胞增殖.Western 印迹杂交显示PNS诱导K562、CHRF-288和Meg-01细胞的GATA-1和GATA-2蛋白表达量增高,分别是未经处理细胞的1.5～2.8倍和2.0～3.1倍;EMSA结果表明PNS诱导三株细胞的GATA-DNA结合复合物条带密度明显增高;HL-60细胞在PNS处理前后均未显示GATA活性.抗体胶移动实验证明PNS诱导的GATA-DNA复合物的主要成分为GATA-1和GATA-2.免疫沉淀显示PNS诱导的GATA-1和GATA-2蛋白均处于磷酸化的功能激活状态.结论 PNS可通过诱导GATA-1 和GATA-2蛋白合成增加,与相关基因上游调控区的启动子和(或)增强子结合的活性增高,而调控与造血细胞增殖、分化相关基因的表达.