蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡过程中对Bcl-2、Survivin、Smac/DIABLO表达的影响

摘要

目的研究蟾蜍灵在诱导HL-60细胞凋亡过程中,对线粒体凋亡途径相关基因Bcl-2、 Bax、Survivin及Smac/DIABLO表达的影响。方法采用锥虫蓝拒染法检测细胞存活情况,细胞形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot分析Bcl-2、Bax、Smac/DIABLO、Survivin及caspase-3蛋白表达,RT-PCR检测Survivin mRNA表达。结果蟾蜍灵抑制HL-60细胞增殖,24,48及72 h的IC50 值分别为25．8,8．0及2．1 nmoL/L。蟾蜍灵大于50．0 nmol/L时可明显诱导HL-60细胞凋亡。50．0 nmol/L蟾蜍灵作用6,12,24及48 h,Bcl-2蛋白表达分别下调至作用前的88．6％,53．3％,19．2％及 9．5％,而Bax蛋白表达无明显变化,Bcl-2/Bax比值由2．0分别降至1．7,1．1,0．4及0．2。Survivin蛋白表达分别下调至作用前的75．2％,54．8％,37．5％及20．3％;Survivin mRNA表达在作用6,12和24 h 后分别下调至作用前的85．7％,39．4％和12．5％,在作用48 h后几乎检测不到。50．0 nmol/L蟾蜍灵作用12,24及48 h,线粒体部分的Smac/DIABLO蛋白表达分别下调至作用前的77．5％,21．2％及 15．3％,而胞浆部分的Smac/DIABLO蛋白表达分别上调至作用前的1．4,2．0．及3．5倍。蟾蜍灵作用 8-48 h可检测到caspase-3的活化亚基。结论蟾蜍灵诱导的HL-60细胞凋亡与Bcl-2及Survivin表达下调、线粒体释放Smac/DIABLO及caspase-3活化有关。