携带SCN3B-C.260突变的Brugada综合征患者特异性诱导多能干细胞的建立及鉴定

摘要

目的 构建Brugada综合征(BrS)患者特异性诱导多能干细胞(iPSCs)模型并进行鉴定.方法 利用一例携带SCN3B-C.260突变的女性BrS患者的外周血分离培养外周血单核细胞(PBMCs),通过仙台病毒,将转录因子Oct4、Sox2、Klf4和cMyc(OSKM)转染到PBMCs,采用非整合重编程技术构建特异性BrS-iPSCs.通过多能性相关基因表达产物(Oct4)免疫荧光染色检测、体外拟胚体形成及三胚层分化能力检测鉴定BrS-iPSCs的多能性,通过核型分析及仙台病毒特异的核糖核酸(RNA)检测鉴定BrS-iPSCs的安全性.结果 构建的特异性BrS-iPSCs为典型的胚胎干细胞样克隆.免疫荧光染色显示多能性相关基因表达产物(Oct4)阳性,体外拟胚体形成及三胚层分化能力检测显示内胚层(甲胎蛋白)、中胚层(Brachyury)和外胚层(PAX-6)特异标记物免疫荧光染色呈阳性.G显带法染色体核型分析显示BrS-iPSCs染色体核型正常,为46XX,各染色体形态及区段无肉眼可见异常.对BrS-iPSCs进行仙台病毒基因组RNA的检测,在第40代时无法检测到仙台病毒基因组的存在.结论 本研究成功构建了具有多能性、核型正常且无外源性基因插入的特异性BrS-iPSCs.