miR-324-5p通过靶向TRIP13基因调控宫颈癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡

摘要

目的探讨miR-324-5p对宫颈癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响及调控机制。方法培养正常宫颈细胞Ectl/E6E7和宫颈癌细胞系Hela、C-33A、CaSki、SiHa,实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-324-5p和甲状腺激素受体因子(TRIP)13 mRNA表达,Western印迹检测TRIP13蛋白表达。转染miR-324-5p模拟物或TRIP13小干扰RNA、或共转染miR-324-5p模拟物和TRIP13过表达载体至Hela细胞,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western印迹检测细胞Nanog、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase-3)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-138-5p与TRIP13的调节关系。结果与Ectl/E6E7细胞比较,宫颈癌细胞系Hela、C-33A、CaSki、SiHa中miR-324-5p表达明显降低(P<0.05),TRIP13 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。过表达miR-324-5p或沉默TRIP13均抑制了Hela细胞增殖、迁移和侵袭,诱导Hela细胞凋亡,并抑制Hela细胞中Nanog、CyclinD1和MMP-2蛋白表达,促进Caspase-3蛋白表达。miR-324-5p在Hela细胞中靶向负调控TRIP13。上调TRIP13部分逆转了过表达miR-324-5p对Hela细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。结论miR-324-5p通过靶向抑制TRIP13阻碍宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移,并诱导细胞凋亡,其可能是宫颈癌治疗的分子靶点。