过表达miR-146b-3p通过靶向调控PCSK9表达对oxLDL诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

摘要

目的 研究miR-146b-3p对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)损伤的影响及机制.方法 用100μg/ml oxLDL诱导HUVECs 24 h,qRT-PCR和Western印迹检测细胞中miR-146b-3p和前蛋白转化酶枯草溶菌素(PCSK)9的表达.实验分为对照(Con)组、oxLDL组、oxLDL+miR-NC组、oxLDL+miR-146b-3p组、oxLDL+si-NC组、oxLDL+si-PCSK9组、oxLDL+miR-146b-3p+pcDNA-PCSK9组、oxLDL+miR-146b-3p+pcDNA组、miR-NC组、miR-146b-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-146b-3p组.流式细胞术检测凋亡率;试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平;双荧光素酶报告系统验证miR-146b-3p与PCSK9的调控关系.结果 oxLDL组HUVECs凋亡率、MDA水平、PCSK9表达量显著高于Con组(P<0.05),SOD和GSH-Px活性、miR-146b-3p表达显著低于Con组(P<0.05).oxLDL+miR-146b-3p组HUVECs凋亡率、MDA水平显著低于oxLDL+miR-NC组(P<0.05),SOD和GSH-Px活性显著高于oxLDL+miR-NC组(P<0.05).oxLDL+si-PCSK9组HUVECs凋亡率、MDA水平显著低于oxLDL+si-NC组(P<0.05),SOD和GSH-Px活性显著高于oxLDL+si-NC组(P<0.05).PCSK9被证实为miR-146b-3p的直接靶点.oxLDL+miR-146b-3p+pcD-NA-PCSK9组HUVECs凋亡率、MDA水平显著高于oxLDL+miR-146b-3p+pcDNA组(P<0.05),SOD和GSH-Px活性显著低于oxLDL+miR-146b-3p+pcDNA组(P<0.05).miR-146b-3p组PCSK9蛋白表达显著低于miR-NC组(P<0.05);anti-miR-146b-3p组PCSK9蛋白表达显著高于anti-miR-NC组(P<0.05).结论 miR-146b-3p通过靶向PCSK9以减轻oxLDL对HUVECs的损伤并抑制细胞凋亡.