柚皮苷通过miR-34a下调MET表达并抑制PI3 K/AKT信号通路的激活调控甲状腺癌细胞增殖和凋亡

摘要

目的 探究柚皮苷(NRG)对甲状腺癌细胞的抗肿瘤活性及其抗肿瘤机制.方法 通过噻唑蓝(MTT)检测NRG对TPC-1和SW1736细胞增殖的影响.采用流式细胞术检测NRG对TPC-1和SW1736细胞凋亡水平的影响.通过RT-qPCR实验检测甲状腺组织内miR-34a及间质表皮转化因子(MET)mRNA的表达水平,同时检测甲状腺癌组织、TPC-1和SW1736细胞内增殖相关蛋白(cyclinD1和c-Myc)、凋亡相关蛋白(survivin、bcl-2、caspase-3和Bax)及炎性介质(CCR6、CXCR4和CXCR7)mRNA的表达水平.通过Western印迹检测TPC-1和SW1736细胞内MET蛋白及PI3K/AKT信号通路相关蛋白(PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT)的表达水平.双荧光素酶报告基因实验验证miR-34a与MET的靶向关系.结果 NRG以剂量和时间依赖性的方式抑制TPC-1和SW1736细胞的增殖,并剂量依赖性地抑制细胞内cyclinD1和c-Myc mRNA表达.同时,NRG促进TPC-1和SW1736细胞凋亡,剂量依赖性的下调细胞内survivin和Bcl-2 mRNA的表达水平,上调caspase-3、cleaved caspase-3和Bax mRNA的表达.炎性介质CCR6、CXCR4和CXCR7 mRNA在甲状腺癌组织、TPC-1和SW1736细胞内表达上调,NRG处理后细胞内炎性介质CCR6、CXCR4和CXCR7 mRNA的表达水平逐渐降低,呈剂量依赖性.miR-34a在甲状腺癌组织、TPC-1和SW1736细胞内的表达下调,NRG可有效上调miR-34a在细胞内的表达.MET mRNA在甲状腺癌组织、TPC-1和SW1736细胞内的表达上调,NRG则可以抑制MET mRNA和蛋白在细胞内的表达.NRG还可抑制TPC-1和SW1736细胞内PI3K/AKT信号通路的激活.miR-34a负调控MET在TPC-1和SW1736细胞内的表达.过表达miR-34a后显著抑制TPC-1和SW1736细胞的增殖,并诱导细胞发生凋亡.同时,过表达miR-34a还显著转抑制cyclinD1、c-Myc、survivin和Bcl-2 mRNA的表达,显著增加细胞内caspase-3、cleaved caspase-3和Bax mRNA的表达.此外过表达miR-34a也显著抑制TPC-1和SW1736细胞内炎性介质CCR6、CXCR4和CXCR7 mRNA的表达水平.结论 miR-34a在甲状腺癌组织和细胞中的表达缺失诱导MET mRNA及蛋白表达的上调,但NRG可调节miR-34a和MET在甲状腺癌细胞内的表达,抑制PI3K/AKT信号通路在细胞内的激活,抑制甲状腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡,从而发挥其抗肿瘤活性.