质粒介导shRNA对心肌细胞kir2.1蛋白表达和搏动频率的影响

摘要

目的构建抑制大鼠心肌细胞kir2.1基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达质粒(pEGFP6-1kir2.1),观察RNAi对大鼠心室肌细胞kir2.1 mRNA和蛋白表达情况和搏动频率的影响.方法选择5个针对大鼠心肌细胞kir2.1基因的RNA干扰位点,分别设计合成5对相应的寡核苷酸链,形成双链后依次将其连入带有U6启动子的载体,得到含5个目的基因的重组质粒pEGFP6-1kir2.1,转染大鼠心肌细胞,转染后72 h RT-PCR和Western-blot检测kir2.1 mRNA和蛋白表达情况,倒置显微镜下观察细胞的搏动情况.结果转染后72 h,实验组心肌细胞kir2.1mRNA和蛋白表达明显低于两对照组(P＜0.01),两对照组无明显差异.转染后72 h,实验组细胞搏动簇搏动频率较转染后48 h进一步增快,两对照组无明显变化.结论真核表达质粒pEGFP6-1kir2.1能明显抑制大鼠心肌细胞kir2.1基因的表达,提高大鼠心肌细胞的自律性.