胃癌干细胞制备方法及在胃癌侵袭转移中的机制

摘要

目的 探讨胃癌干细胞制备方法及其在胃癌侵袭转移中的机制.方法 建立胃癌细胞成球培养方法,采用球形克隆实验、平板克隆实验及裸鼠成瘤实验测定培养胃癌干细胞(GCSCs)及SGC7901细胞的致瘤性和侵袭性.通过Transwell迁移试验测定人胃癌SGC7901细胞株和GCSCs细胞在胃癌转移性中的作用.用基因芯片筛选出该细胞中高表达分子ANTXR2,分析其在干细胞侵袭转移中的作用.结果 (1)人胃癌SGC7901细胞株培养后开始贴壁生长,培养条件为RPMI-1640(10. 0% FBS);GCSCs细胞为悬浮生长,培养条件为无血清培养基,细胞贴壁生长后呈梭形的间质形态;(2)球形克隆:GCSCs细胞瘤球数量为(63. 92 ± 4. 51)个,显著多于人胃癌SGC7901细胞株的(6. 49±0. 70)个(P<0. 05);(3)平克隆实验:GCSCs细胞瘤球数量为(9. 61±1. 59)个,显著多于人胃癌SGC7901细胞株的(1. 78±0. 82)个(P<0. 05);(4)成瘤实验:裸鼠体内移植1×104个球细胞即可发生肿瘤,GCSCs细胞移植瘤直径,显著大于人胃癌SGC7901细胞株(P<0. 05);(5)Transwell迁移:GCSCs细胞穿过基底膜细胞数为(171. 92±12. 31)个,显著高于人胃癌SGC7901细胞株的(85. 39±4. 91)个(P<0. 05);结晶紫染色可以看出,GCSCs细胞穿过基底膜细胞数多于人胃癌SGC7901细胞株;(6)流式细胞术检测人胃癌SGC7901细胞株中ANTXR2阳性细胞比例占4. 98% ,GCSCs细胞中ANTXR2阳性细胞比例占85. 48% .对ANTXR2阳性的胃癌组织切片采用实时定量PCR方法测定显示:ANTXR2与干细胞标志CD44有共定位现象.结论 采用成球培养法能成功分离/富集胃癌干细胞,具有多向分化、克隆及成瘤能力,ANTXR2在胃癌干细胞侵袭转移中发挥了重要作用,可以作为胃癌预后指标.