基于细胞自噬JNK信号通路探讨通络糖泰方对高糖环境下大鼠雪旺细胞的影响

摘要

目的探讨通络糖泰方对高糖环境下大鼠雪旺细胞自噬相关蛋白的影响,基于c-JUN氨基末端蛋白激酶(JNK)/自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1)/微管相关蛋白1轻链3(LC3Ⅱ)阐明其分子机制。方法30只SD雄性大鼠制备含药血清,采用50 mmol/L的葡萄糖雪旺细胞培养基制备高糖雪旺细胞模型,实验分为6组:空白组(5.6 mmol/L葡萄糖+10%空白血清)、模型组(50 mmol/L葡萄糖+10%空白血清)、甲钴胺片(弥可保)组(50 mmol/L葡萄糖+10%弥可保含药血清)、低剂量通络组(50 mmol/L葡萄糖+5%通络糖泰血清)、中剂量通络组(50 mmol/L葡萄糖+10%通络糖泰血清)和高剂量通络组(50 mmol/L葡萄糖+20%通络糖泰血清)。细胞增殖与活性检测法(CCK-8)观察不同时段各组雪旺细胞活性,流式细胞术(FCM)检测各组雪旺细胞凋亡百分比,细胞自噬荧光染色法观察各组雪旺细胞自噬,Western印迹法检测各组雪旺细胞p-JNK、Beclin1和LC3Ⅱ蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组雪旺细胞JNK、Beclin1和LC3ⅡmRNA表达水平。结果与空白组比较,模型组雪旺细胞活性显著降低(P<0.01),凋亡率增加(P<0.01),细胞自噬泡形成显著减少(P<0.01),p-JNK蛋白和mRNA表达显著升高、Beclin1和LC3Ⅱ蛋白和mRNA表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,弥可保组和高剂量通络组细胞活力明显增加(P<0.05),凋亡率显著降低(P<0.01),自噬泡形成明显增多(P<0.01),p-JNK蛋白和mRNA表达升高、Beclin1和LC3Ⅱ蛋白和mRNA表达降低(P<0.05)。结论通络糖泰方能抑制高糖环境下JNK信号通路的异常激活,提高雪旺细胞自噬活性,抑制细胞凋亡,其作用机制可能与调控JNK/Beclin1/LC3Ⅱ信号通路有关。