miR-21-3p靶向RNF-11基因对脊索瘤细胞生物学行为的影响

摘要

目的 观察miR-21-3p对脊索瘤细胞生物学行为的影响,并初步探究其作用机制。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-21-3p在脊索瘤组织及配对癌旁组织中的表达,在脊索瘤细胞U-CH1中转染特异性miR-21-3p inhibitors(anti-miR-21-3p组)或阴性对照inhibitors(anti-NC组),同时设置空白对照(Blank组),分别采用噻唑蓝(MTT)、克隆形成、流式细胞术、Transwell和划痕实验探究下调miR-21-3p对U-CH1细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响,采用qRT-PCR和Western印迹分析细胞中上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达,生物信息学软件TargetScan预测miR-21-3p的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miR-21-3p和RNF-11基因的靶向关系。结果 脊索瘤组织中miR-21-3p的表达量明显高于癌旁组织(P<0.05),与Blank组相比,anti-miR-21-3p组U-CH1细胞中miR-21-3p的表达量、N-cadherin和Vimentin的mRNA和蛋白表达水平降低,细胞增殖、侵袭和迁移能力均受到抑制,凋亡率、E-cadherin的mRNA和蛋白表达水平升高,差异均有显著意义(P<0.05)。生物信息学分析发现miR-21-3p的可能靶基因是RNF-11,双荧光素酶报告基因实验证实了RNF-11是miR-21-3p的靶基因。结论 miR-21-3p靶向RNF-11调控脊索瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移等生物学行为。