腺病毒介导的受体活性修饰蛋白-1基因对兔心肌梗死后炎症因子及心肌纤维化的影响

摘要

目的观察腺病毒介导的受体活性修饰蛋白-1（RAMP1）基因对心肌梗死后心肌纤维化的影响及其作用机制。方法建立兔心肌梗死模型,随机分为RAMP1转染组、空载病毒载体组（空载病毒组）和PBS组;模型建立后40 min经局部注射带绿色荧光蛋白报告基因的RAMP1重组腺病毒载体（pAd2-EGFP-RAMP1）和空病毒载体及PBS到心肌梗死交界区,病毒注射后7 d、14 d和28 d处死动物取心脏标本,应用Western blot检测心肌组织局部NF-κB表达,Masson染色检测心肌梗死边缘区胶原含量。应用ELISA法测定心肌梗死模型建立前及病毒注射后血清TNF-a浓度,心脏超声心动图检测病毒注射后28 d心功能。结果病毒注射后7 d,RAMP1转染组局部心肌组织RAMP1表达量为（67.33±3.97）%,较空载病毒组（20.59±3.26）%和PBS组（23.80±5.08）%明显增加（P＜0.05）。病毒注射后7 d,与空载病毒组（62.60±6.18）%和PBS组（62.95±5.17）%比较,RAMP1转染组心肌局部NF-κB表达下降（26.54±5.13）%（P＜0.05）。与空载病毒组和PBS组比较,RAMP1转染组不同时间点血清TNF-a表达减少[7 d:（136.74±5.42）μg/L比（196.97±14.17）μg/L,（203.67±13.90）μg/L;14 d:（154.51±13.61）μg/L比（112.22±6.74）μg/L,（160.46±14.27）μg/L;28 d:（51.10±5.62）μg/L比（95.55±9.94）μg/L,（98.96±12.68）μg/L,均P＜0.05]。梗死边缘交界区心肌胶原纤维含量,与空载病毒组和PBS组比较,RAMP1转染组14 d和28 d心肌胶原纤维含量降低[14 d:（7.10±0.98）%比（19.52±2.32）%,（17.91±0.96）%;28 d:（17.04±2.44）比（34.10±5.59）%,（33.98±4.33）%,均P＜0.01]。梗死后28 d RAMP1转染组梗死面积（26.54±5.13）%较EGFP组（32.20±3.73）%和C组（35.58±2.65）%缩小（P＜0.01）,心功能改善也优于空载病毒组和PBS组（P＜0.01）。结论外源性RAMP1基因转染可能通过抑制局部NF-κB活性,下调炎性细胞因子TNF-a等表达,部分阻断了梗死后促纤维化发生的环节,从而在一定程度上减轻梗死交界区胶原纤维过度沉积,改善梗死后心功能。