高尔基磷蛋白3表达在人结肠癌细胞对5－氟尿嘧啶化疗耐药中的作用

摘要

目的 探讨人结肠癌细胞HT29对5－氟尿嘧啶化疗耐药与高尔基磷蛋白3（Golgiphosphoprotein 3, GOLPH3）基因表达的关系及其机制。方法 将HT29细胞分为4组：对照组（HT29）、转染组（siRNA－GOLPH3）、实验组1（30 μmol/L 5－FU）、实验组2（siRNA－GOLPH3＋30 μmol/L 5－FU）。用RT－PCR和Western blot检测HT29细胞转染后的沉默效果；MTT和平板克隆实验检测各组HT29细胞增殖、成瘤能力；Western blot检测GOLPH3、P－糖蛋白、β－catenin蛋白的表达。结果 转染组与对照组相比,HT29细胞GOLPH3 mRNA（0.147±0.021比1.000±0.078,t＝12.296,P＆0.01）和蛋白的表达量（0.077±0.399比1.003±0.235,t＝6.723,P＆0.01）、吸光度A值（0.769±0.086比1.000±0.082,t＝3.885,P＆0.01）及成瘤能力（297±21比430±36,t＝5.492,P＆0.01）均明显降低,差异均有统计学意义。实验组1、实验组2与对照组相比,吸光度A值（0.803±0.101比1.050±0.140,t＝2.855,P＆0.05；0.242±0.091比1.050±0.140,t＝9.664,P＆0.001）和成瘤能力（73±8比427±29,t＝20.363,P＆0.001；305±22比427±29,t＝5.840,P＆0.01）均显著降低,且实验组2的吸光度A值、成瘤能力明显低于实验组1（t＝8.264,P＆0.001；t＝17.346,P＆0.001）,差异有统计学意义。与对照组相比（0.967±0.094、1.001±0.199、1.000±0.101）,实验组1P－糖蛋白、GOLPH3、β－catenin蛋白表达量（3.634±0.574、2.424±0.261、2.324±0.418）均显著升高（t＝7.944,P＆0.01；t＝7.520,P＆0.01；t＝5.330,P＆0.01）,差异均有统计学意义,实验组2中这些蛋白表达量（0.520±0.176、0.466±0.159、0.933±0.049）较实验组1降低（t＝8.983,P＆0.01；t＝11.106,P＆0.001；t＝5.724,P＆0.01）,差异均有统计学意义。结论 GOLPH3基因表达可通过激活Wnt/β－catenin细胞信号通路参与HT29结肠癌细胞对5－氟尿嘧啶化疗的耐药性。