Smac/DIABLO过表达对人结肠癌细胞凋亡的影响

摘要

背景:Smac/DIABLO是一种线粒体促凋亡蛋白,研究表明其在结肠癌细胞中表达降低.目的:研究Smac/DIABLO对人结肠癌细胞生长的影响及其可能的促凋亡机制.方法:将pcDNA3.1-Smac质粒或pcDNA3.1空质粒以脂质体转染入人结肠癌细胞株LoVo,以未转染细胞作为空白对照.以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Smac mRNA表达,蛋白质印迹法检测Smac蛋白表达,Hoechst 33258染色观察凋亡细胞核形态学变化,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪分析检测细胞凋亡率,PI染色流式细胞仪分析检测细胞周期,Caspase-3分光光度法检测试剂盒检测Caspase-3活性.结果:pcDNA3.1-Smac质粒转染12 h后,LoVo细胞Smac mRNA表达增加;转染48 h后,Smac蛋白表达增加.转染48 h后,Smac组LoVo细胞呈现明显凋亡细胞核形态学特征,凋亡率显著高于LoVo细胞组和空质粒组,G0/G1期细胞增多,Caspase-3活性亦显著高于空质粒组(P＜0.05).结论:Smac/DIARLO可激活caspase-3途径,抑制人结肠癌细胞生长,促进细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G0/G1期.