程序性细胞死亡因子4 RNA干扰对胃癌细胞株MKN28凋亡的影响及其调控机制

摘要

程序性细胞死亡因子4(PDCD4)是一种新的抑癌基因,在肿瘤的发生、发展、治疗和预后中起重要作用.目的:探讨PDCD4 RNA干扰对胃癌细胞株MKN28凋亡的影响及其调控机制.方法:设计PDCD4短发夹RNA(shRNA)干扰序列,构建干扰质粒并转染MKN28细胞,设立阴性对照组和空白对照组.以蛋白质印迹法检测PDCD4和凋亡相关蛋白FLIP、Caspase-8和Cleaved-Caspase-8的表达,以Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡.结果:PDCD4 shRNA干扰质粒转染MKN28细胞后,获得稳定低表达PDCD4的细胞模型.干扰效率为86%.与阴性对照组和空白对照组相比,干扰组PDCD4蛋白表达显著降低(0.11±0.01对0.86±0.18和0.81±0.12.P<0.01),MKN28细胞凋亡率亦显著降低(7.13%±0.86%对13.16%±2.35%和12.02%±2.11%,P<0.05).与空白对照组相比,干扰组FLIP表达显著增高(1.25±0.34对0.63±0.11,P<0.01),而Caspase-8和Cleaved-Caspase-8表达显著降低(0.26±0.08对0.76+0.12,0.11±0.03对0.36±0.09,P<0.01).结论:干扰PDCD4表达可抑制胃癌细胞MKN28的凋亡,且这种抑制作用可能是由于干扰PDCD4促进抗凋亡蛋白FLIP的表达,从而抑制Caspase-8的活性引起的.