体外诱导人脐血间充质干细胞向肝细胞样细胞分化的研究

摘要

目的探讨人脐血间充质干细胞能否在体外诱导分化为肝细胞样细胞,并探索其定向诱导分化为肝细胞样细胞的分化机制.方法无菌条件下采集正常产妇脐血,用相对密度为1.077的淋巴细胞分离液分离脐血MNC,进而采用贴壁培养法获得MSC,流式细胞仪检测其表面标志.分别用HGF、FGF4、俩者联合、无生长因子四种处理因素,及含2%FBS的DMEM,1×ITS进行诱导培养,并于诱导前及诱导后的第7、14、21、28天留取细胞,RT-PCR法检测AFP、白蛋白及C-met、FGFR2mRNA的表达,免疫细胞化学法检测AFP、白蛋白、抗肝细胞抗体和CK18的表达,PAS法进行糖原染色,分析是否诱导出肝细胞样细胞.结果MSC强表达CD29、CD44,不表达CD34.诱导后7,21天分别检测出AFP,白蛋白mRNA及蛋白的表达,28天检测出CK18、抗肝细胞抗体的表达,21天、28天均可检测到糖原染色阳性细胞,随诱导时间的延长C-met,FGFR2 mRNA表达增高,HGF+FGF4诱导组肝系细胞标志阳性率均高于单独生长因子诱导组(P＜0.05);单独生长因子诱导组间无明显差异(P＞0.05).无生长因子诱导组在以上时间点均未检测到上述指标.结论HGF、FGF4均能诱导人脐血MSC分化为具有肝系细胞表型和功能的细胞,且二者在一定程度上有联合作用.生长因子与其相应受体之间,可能存在正反馈调节机制.