Parkin促进HepG2细胞自噬并抑制星型孢菌素诱导的细胞凋亡

摘要

目的观察Parkin在星型孢菌素(staurosporine,STS)诱导的HepG2细胞凋亡及细胞自噬中的作用。方法流式细胞仪检测STS作用前后线粒体膜电位变化;Western blotting检测经STS处理后HepG2细胞caspase3、caspase7、PARP、Parkin/PINK1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、ATg5、Vps34表达水平;免疫荧光法检测线粒体细胞色素C的释放情况;双荧光mRFP-eGFP-LC3自噬指示系统检测细胞自噬率。在HepG2细胞中过表达重组载体Parkin-flag,经STS处理后,蛋白质印记法检测凋亡蛋白表达变化,双荧光mRFP-eGFP-LC3自噬指示系统检测细胞自噬率改变。结果与对照组相比,STS下调线粒体膜电位并促进细胞色素C释放,同时上调凋亡蛋白cleaved-caspase3、cleaved-caspase7及PARP表达水平。经STS处理后Parkin蛋白表达被抑制,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及自噬相关蛋白ATg5、Vps34的表达下降。转染mRFP-eGFP-LC3后,STS组自噬体及自噬溶酶体形成明显减少。过表达Parkin后细胞自噬率明显上调,且过表达Parkin明显抑制了STS引起的凋亡蛋白激活。结论Parkin促进HepG2细胞自噬并抑制了STS诱导的细胞凋亡。