抑制自噬促进冬凌草甲素诱导的多发性骨髓瘤细胞凋亡涉及胞内ROS产生

摘要

目的：本实验主要研究冬凌草甲素诱导多发性骨髓瘤发生自噬、凋亡，两者之间的关系以及所涉及的相关机制。方法：利用MTT比色法检测冬凌草甲素对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的增殖活性影响；透视电镜观察细胞内凋亡和自噬的形态学改变；TUNEL检测细胞凋亡；分别利用以下技术检测处理后的细胞内的自噬变化：使用QDs605nm-Anti-LC3荧光探针以及免疫荧光技术定位细胞胞内LC3I和LC3Ⅱ蛋白。利用western blot免疫印记技术检测Beclin 1蛋白表达水平；利用DCFH-DA探针以及流式细胞术检测细胞胞内ROS水平。结果：冬凌草甲素能明显抑制RPMI8226细胞增殖，其抑制作用呈时间、剂量依赖性；冬凌草甲素能同时诱发细胞凋亡、自噬和胞内ROS产生；NAC完全抑制胞内ROS产生后冬凌草甲素诱导的细胞凋亡消失；3-MA抑制自噬后，冬凌草甲素诱导的胞内ROS产生进一步增多，凋亡增多。结论：冬凌草甲素能明显抑制RPMI8226细胞增殖；冬凌草甲素同时诱发细胞凋亡和自噬；胞内ROS产生介导冬凌草甲素诱导的凋亡；凋亡为细胞死亡的主要途径．而自噬通过下调胞内ROS产生抑制凋亡。