COX1、12SrRNA、16SrRNA基因复合扩增种属鉴定研究

摘要

目的 利用线粒体的特点构建一种特异性好、灵敏度高、稳定性好、操作简便,适用于法医学种属鉴定的复合扩增体系.方法 查找Gene bank上常见动物mt DNA序列,用序列比对软件,对人和动物序列进行分析,选出COX1、12SrRNA、16SrRNA区域.使用primer5和primer3(online)设计引物,COX1的引物有人类特异性,12SrRNA和16SrRNA的引物作为内参对照可以匹配人和大部分常见动物.收集人和恒河猴,猪、牛、羊、兔、鲈鱼、鲍鱼、鸭、鸡、狗、鼠11种动物的肌肉或血液样本,用Chelex-100法提取DNA,复合扩增COX1、12SrRNA、16SrRNA基因片段,琼脂糖凝胶电泳分离扩增产物.结果 人的样本出现三条带,分别为COX1、12 SrRNA、16SrRNA的扩增产物,大小分别为202、231、395 bp;11种动物出现两条带,分别为12SrRNA和16SrRNA的扩增产物,大小分别在230、395bp左右.复合扩增体系灵敏度为2.5pg,而特异性引物COX-1的灵敏度为10-8 pg.结论 该复合扩增体系可以明确区分人与动物,灵敏度高,可应用法医学中的种属鉴定.