虹鳟IL-17多克隆抗体的制备及初步鉴定

摘要

本研究根据NCBI已发表序列设计引物,提取经植物血凝素刺激后的虹鳟Oncorhynchus mykiss头肾细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增IL-17成熟肽基因,测序结果表明所获得的序列与发表序列相一致.将该基因重组至原核表达载体pET32a中,并转化大肠杆菌Escherichia coli Rosetta,进行诱导表达.SDS-PAGE电泳结果表明:目的蛋白以包涵体形式表达,大小约为32kDa,重组蛋白经Ni-NTA系统纯化、复性后纯度达90％以上,以其免疫小鼠制备虹鳟IL-17多克隆抗体.ELISA结果显示其效价为1∶25600,而间接免疫荧光结果显示所制备的多克隆抗体能够特异性地识别真核细胞中瞬时表达的虹鳟IL-17.本研究成功制备虹鳟IL-17多克隆抗体,为下一步IL-17在虹鳟黏膜免疫中的作用及其佐剂效应研究奠定基础.