可溶性人胎盘生长因子ELISA检测试剂盒的建立及性能分析

摘要

目的:研发人血清及尿液可溶性胎盘生长因子(sPLGF)的ELISA检测试剂盒并进行性能测试.方法:以抗人PLGF单克隆抗体包被微孔板,加入重组sPLGF和生物素标记的检测抗体,形成抗原抗体复合体,加入链亲合素辣根过氧化物酶和底物TMB实现比色反应;从线性范围、准确度、精密度、样品基质及样品前处理方法等指标进行性能评价,并与市售进口同类产品进行比较.结果:捕获抗体的最适包被量为400ng/well,包被条件为4℃孵育16～20h,检测抗体的最适工作浓度为1μg/ml,样品最适反应条件为37℃孵育2h,适合的封闭液及样品稀释液组合为3％BSA-PBS和0.1％BSA-PBS;验证该试剂盒的有效检测范围为15.6～2000pg/ml,准确度为85％～115％;批次内变异系数CV≤10％,批次间变异系数CV≤15％;其检测范围、准确度、精密度、灵敏度及样品适用范围等与市售进口试剂盒基本一致.结论:本项目开发的人sPLGF检测试剂盒实现了人血清和尿液中的内源sPLGF的定量检测,其检测性能稳定、可靠,具有比进口试剂盒检测范围更广、价格更低的优势,可用于临床检测血液及尿液中的内源性sPLGF水平.