微小RNA-1973靶向细胞因子信号转导抑制因子2对乳腺癌细胞恶性行为的影响

摘要

目的观察微小RNA（miR）-1973靶向细胞因子信号转导抑制因子2（SOCS2）对乳腺癌细胞增殖、凋亡及侵袭迁移的影响。方法体外培养BT-483细胞,对其转染并分为空白对照组（NG组）、阴性转染组（NC组）、抑制miR-1973表达组（miR-1973-inhibitor组）。倒置荧光显微镜下观察转染效果;采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测miR-1973水平;噻唑蓝（MTT）法、流式细胞仪检测分别检测各组细胞增殖、凋亡;划痕实验检测BT-483细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;免疫印迹法检测人增殖细胞核抗原（Ki-67）、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）、bcl-2相关X蛋白（bax）、侵袭迁移相关蛋白E-钙黏附蛋白（E-cadherin）、N-钙黏附蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）及SOCS2蛋白表达;应用TargetScan数据库预测miR-1973与SOCS2的靶向关系并用双荧光素酶报告基因实验加以验证。结果 BT-483细胞转染成功;抑制miR-1973表达后,与NG组[（12.78±2.07）%、（17.62±2.65）%]、NC组[（13.77±2.06）%、（18.53±2.77）%]比较,24、48 h后miR-1973-inhibitor组BT-483细胞增殖抑制率均显著升高[（18.69±2.80）%、（45.55±13.61）%,F=11.018、22.673,P＆0.05];与NG组BT-483细胞凋亡率、划痕治愈率及细胞侵袭数[（11.03±1.65）%、（48.25±7.23）%、（237.53±35.63）个]、NC组[（12.12±1.82）%、（46.73±7.01）%、（228.98±34.35）个]比较,miR-1973-inhibitor组BT-483细胞凋亡率[（26.68±4.00）%]显著升高（F=62.370,P＆0.05）,划痕治愈率[（22.77±3.42）%]、细胞侵袭数[（115.77±17.37）个]显著降低（F=32.507,30.222,P＆0.05）。与NG组、NC组比较,miR-1973-inhibitor组BT-483细胞中bax、E-cadherin蛋白表达显著升高（F=32.918、28.574,P＆0.05）,Ki-67、bcl-2、N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著减少或降低（F=8.805、15.085、37.065、15.097,P＆0.05）。TargetScan数据库预测显示SOCS2是miR-1973的潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验证实二者存在靶向关系,且miR-1973可负向调控SOCS2表达。结论沉默miR-1973可能通过靶向上调SOCS2表达抑制乳腺癌BT-483细胞增殖、侵袭及迁移,并诱导细胞凋亡。