过氧蛋白同源物通过调控Wnt/β-连环蛋白信号通路影响胃癌MGC803细胞生长和侵袭迁移能力

摘要

目的 探讨过氧蛋白同源物(PXDN)基因对人胃癌MGC803细胞生长和侵袭迁移能力的影响及其机制.方法 收集从2019年4月到2019年6月期间福建医科大学附属第二医院胃肠外科确诊为胃癌的未经过放疗和化疗的手术标本及配对的癌旁组织,各10例.通过癌症肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库筛选与胃癌相关的突变基因,并通过筛选GEO数据库中与胃癌相关的RNA测序数据集(GSE122796)分析突变基因的差异表达状况.收集临床上未经放、化疗的胃癌组织及配对的癌旁组织各10例,采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法和蛋白质印迹法(Western blot)检测PXDN在癌旁组织和胃癌组织中的表达.通过Western blot检测PXDN在4种人胃癌细胞株的表达.构建小干扰RNA沉默PXDN的表达,将培养的细胞随机随机分为NC-SiRNA组(转染阴性对照组)和PXDN-SiRNA组,并采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、划痕实验、Transwell法,检测MGC803细胞的增殖、侵袭和迁移的变化.此外,Western blot检测Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的改变.应用SPSS 22.0统计软件分析,采用t检验或单因素方差进行分析.结果 TCGA与GEO数据库显示PXDN是胃癌发病相关的高突变率(15.4％)及显著差异基因[Log2 FC=2.83±0.72,padj=0.031,P＜0.05].RT-qPCR和Western blot结果显示PXDN在胃癌组织表达量明显上调[(0.92±0.12)比(0.61±0.09)、(1.65±0.23)比(1.00±0.25) ,t=12.680、17.520,P ＜0.05],差异有统计学意义.Western blot检测PXDN在MGC803细胞株表达量较其他细胞株高(F=23.810,P＜0.05),差异有统计学意义.沉默PXDN基因可显著抑制MGC803细胞的增殖[吸光度(A)值:(0.62±0.05)比(1.05±0.08),t=7.740,P＜0.05]、迁移[(41.25±5.67)个比(85.23±4.28)个,t=21.120,P＜0.05]、侵袭[(42.47±3.98)个比(86.16±4.19)个,t=20.090,P＜0.05],差异有统计学意义.此外,沉默PXDN后,糖原合成酶激酶-3β (Gsk-3β)蛋白表达水平显著上调,β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白(Cyclin) D1表达水平显著下降(t=12.590,P＜0.05),差异有统计学意义.结论 PXDN显著促进MGC803细胞增殖、侵袭和迁移能力,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关.