慢病毒介导的性别决定区Y框蛋白9表达下调对抑制Wnt信号通路调控乳腺癌细胞侵袭能力的影响

摘要

目的研究慢病毒介导的性别决定区Y框蛋白9(SOX9)表达下调对抑制Wnt信号通路调控乳腺癌细胞侵袭能力的影响。方法以Wnt信号通路抑制剂XAV939处理乳腺癌细胞MDA-MB-436,噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖活性,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测细胞中SOX9蛋白及Wnt信号通路蛋白β-连环蛋白(β-catenin)、下游靶基因c-myc表达水平。SOX9 siRNA慢病毒感染MDA-MB-436细胞,Realtime PCR和蛋白质印迹法检测干扰效果。细胞划痕实验测定细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和上皮间质转化(EMT)相关蛋白上皮性钙黏附素(E-cadherin)、神经性钙黏附素(N-cadherin)表达水平。结果 XAV939能够下调MDA-MB-436细胞增殖活性,抑制乳腺癌细胞中SOX9蛋白表达,降低Wnt信号通路蛋白β-catenin、c-myc表达水平。SOX9 siRNA慢病毒感染后的MDA-MB-436细胞中SOX9 m RNA和蛋白水平降低。下调SOX9的MDA-MB-436细胞侵袭数目从(85.56±4.35)降低至(64.15±3.25),迁移率从(74.16±6.25)%降低至(54.12±3.96)%,细胞中MMP-2蛋白水平降低,E-cadherin蛋白水平升高,N-cadherin蛋白水平降低。XAV939也能够下调MDA-MB-436细胞侵袭数目从(85.56±4.35)降低至(51.23±2.87),迁移率从(74.16±6.25)%降低至(45.28±3.59)%,抑制细胞中MMP-2蛋白表达,促进E-cadherin蛋白表达,下调N-cadherin蛋白表达水平。XAV939处理下调SOX9的MDA-MB-436细胞,细胞侵袭数目降低至(34.18±2.59),迁移率降低至(24.78±1.68)%,细胞中MMP-2蛋白表达水平下降更多,E-cadherin蛋白水平升高更多,N-cadherin蛋白水平下降更多。结论抑制Wnt信号通路下调乳腺癌细胞中SOX9的表达水平,敲低其表达能够协同Wnt信号通路抑制剂降低乳腺癌细胞侵袭迁移能力。