性别决定相关基因簇9对胰腺癌干细胞增殖、侵袭的影响及其与吉西他滨耐药性的关系

摘要

目的探讨性别决定相关基因簇9（SOX9）对胰腺癌干细胞增殖、侵袭的影响及其与吉西他滨耐药性的关系。方法流式细胞术分选PANC-1细胞（购自中国科学院上海细胞生物学研究所）中以CD24+CD44+ESA+为标志物的细胞亚群,并通过小鼠（购自北京维通利华实验动物技术有限公司）移植成瘤实验验证胰腺癌干细胞的特性。分选的胰腺癌干细胞分为对照组、shNC组和shSOX9组。实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测各组细胞中SOX9的表达。细胞计数试剂盒（CCK-8）检测各组细胞的增殖能力。Transwell细胞侵袭实验检测各组细胞的侵袭能力。CCK-8检测各组细胞对吉西他滨的敏感性。细胞流式术检测各组细胞经吉西他滨处理后的凋亡。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,率的比较采用χ2检验。结果 PANC-1细胞中分选出CD24+CD44+ESA+细胞（占0.8%）,其在小鼠皮下移植后的移植瘤体积[（567.35±23.21） mm3]大于接种PANC-1细胞小鼠的皮下移植瘤体积[（106.83±12.43） mm3,t=18.040,P＆0.01]。SOX9 mRNA在shSOX9组中的相对表达量（0.42±0.05）低于对照组（1.00±0.03）和shNC组（1.01±0.03,F=77.470,P＆0.01）;SOX9蛋白表达量在shSOX9组（0.12±0.04）中低于对照组（0.64±0.12）和shNC组（0.62±0.07,F=85.230,P＆0.01）。shSOX9组细胞的吸光度值（0.74±0.13）低于对照组（1.38±0.21）和shNC组（1.37±0.23,F=78.320,P＆0.01）。shSOX9组侵袭细胞数目[（162.20±16.34）个]低于对照组[（250.50±24.21）个]和shNC组[（253.13±21.78）个,F=21.040,P＆0.01]。shSOX9组吉西他滨的半数抑制浓度（IC50）值为（2.78±0.08） mg/L,低于对照组[（5.12±0.13） mg/L]和shNC组[（5.08±0.11） mg/L,F=23.450,P＆0.01]。shSOX9组细胞的凋亡率为[（35.93±3.25）%],高于对照组[（20.08±3.14）%]和shNC组[（19.76±2.67）%,χ2=50.130,P＆0.01]。结论沉默SOX9可抑制胰腺癌干细胞增殖与侵袭,提高胰腺癌干细胞对吉西他滨的敏感性。