PDX1过表达在胰腺癌细胞PANC-1对吉西他滨敏感性的探讨及IL-15对胰腺癌细胞PANC-1增殖和凋亡的影响

摘要

第一部分PDX1过表达在胰腺癌细胞PANC-1对吉西他滨敏感性的研究
　　目的：探讨PDX1过表达是否能够影响PANC-1细胞对吉西他滨的敏感性。
　　方法：（1）从Hela细胞中获取PDX1基因并将其构建到PCMV6-Entry空质粒上形成PCMV6-Entry-PDX1重组质粒。（2）培养人胰腺癌PANC-1细胞，待细胞生长状态良好时种入24孔板，分别将PCMV6-Entry空质粒和PCMV6-Entry-PDX1重组质粒利用脂质体Lipo3000转入PANC-1细胞中，48h后加入G418筛选2周形成稳定的过表达细胞。（3）将稳定的过表达细胞扩大培养，待细胞生长状态良好后种入24孔板中，培养72h提取总蛋白检测PDX1表达情况及对PI3K-AKT是否有影响（4）将转染细胞分别种入96孔板中，并用0,10,100,200,400uM浓度的吉西他滨分别作用48h和72h。MTS法在490nm处测定其吸光值。
　　结果：（1）成功获取 PDX1基因并将其构建到 PCMV6-Entry空质粒上形成PCMV6-Entry-PDX1重组质粒，测序结果显示，重组质粒序列正确。（2）经Western blot分析显示成功构建了PDX1过表达PANC-1细胞，且其能够下调p-AKT的水平，说明其在一定程度上能够抑制PI3K-AKT信号通路。（3）MTS法分析吉西他滨对过表达细胞增殖的影响显示：与空质粒组相比较，48h和72h时PDX1过表达细胞增殖受到抑制，具有时间依赖性但是没有剂量依赖性。
　　结论：PDX1能够提高胰腺癌细胞PANC-1对吉西他滨的敏感性，具有时间依赖性但是不具有剂量依赖性。
　　第二部分 IL-15对胰腺癌细胞PANC-1增殖和凋亡的影响
　　目的：探讨IL-15对胰腺癌细胞PANC-1的增殖和凋亡的影响。
　　方法：(1)利用PCR检测PANC-1细胞IL-15受体的表达情况。待细胞状态良好时，将其种入细胞板中。24h后分别用0,4,12,36,108,216 ng/ml浓度的IL-15作用细胞。(2)MTS法测不同浓度IL-15对PANC-1细胞增殖的影响。（3）流式细胞仪检测不同浓度IL-15作用PANC-1细胞72 h对细胞凋亡的影响。（4）Western blot分析不同浓度IL-15对PANC-1细胞凋亡蛋白Bax,Bcl-2,Caspase3及周期蛋白CyclinE等的变化。（5）利用单一浓度IL-15作用PANC-1细胞分别为0,1,6,12,24,48,72 h并检测凋亡蛋白Bax,Bcl-2,Caspase3及周期蛋白CyclinE等的变化。
　　结果：（1）PANC-1细胞表达IL-15受体α亚单位而不表达β和γc亚单位。
　　（2）MTS结果显示:不同浓度IL-15作用PANC-1细胞48h与空白对照组相比没有统计学差异，作用72 h与空白对照组比较低剂量没有抑制作用，而高剂量有抑制作用（3）流式分析结果显示：低剂量IL-15对PANC-1没有促进凋亡的作用而高剂量具有促进凋亡的作用，浓度越高凋亡越明显。（4）Western blot分析显示：IL-15能够上调Bax，Caspase3的表达降低Bcl-2的表达，同时能够抑制p-AKT的表达。（5）结果显示：随着时间增加BAX和Caspase3表达增加而Bcl-2降低。6,12,24,48 h组 CyclinE表达增加而72 h时表达降低与空白对照组相比没有统计学差异。p-AKT在1,6,12,24,48,72 h表达降低与对照组相比有统计学差异，p-STAT3在24,48和72 h表达增加与对照组相比具有统计学差异。
　　结论：IL-15能够抑制 PANC-1细胞的增殖呈时间和剂量依赖性，也能够诱导PANC-1细胞的凋亡。

目录

声明

英文缩略词表

第一部分 PDX1过表达在胰腺癌细胞PANC-1对吉西他滨敏感性的探讨

1.引言

2.材料与方法

3.实验结果

4.讨论

5.结论

6.参考文献

第二部分 IL-15对胰腺癌细胞PANC-1增殖和凋亡的影响

1.前言

2. 材料与方法

3.实验结果

4.讨论

5.结论

6.参考文献

附录

致谢

综述:细胞因子，炎症与胰腺癌研究进展