小干扰RNA沉默干扰素调节因子-8对缺氧复氧后肺泡上皮细胞凋亡的影响

摘要

目的观察小干扰RNA（siRNA）靶向沉默干扰素调节因子-8（IRF-8）对缺氧复氧后肺泡上皮细胞凋亡的影响。方法将IRF-8 siRNA、Negative control（NC）siRNA通过脂质转染试剂转染至肺泡上皮细胞株[L2（购自中国上海拜利生物科技有限公司）],将细胞分为4组,si-IRF-8组,转染含有IRF-8 si-RNA的细胞组;质粒对照组,转染Negative control（NC） siRNA的细胞组;正常对照组,无转染质粒,完全正常培养;阴性对照组,无质粒转染,给与缺氧复氧干预。通过蛋白质印迹法（Western blot）检测肺泡上皮细胞L2细胞株转染后凋亡相关分子标志物:活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（cleaved Caspase-3）;聚合酶链反应（PCR）检测Caspase-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白（bax）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）的转录水平变化。组间比较采用独立样本t检验。结果转染IRF-8 siRNA后,L2细胞内IRF-8相对表达水平明显下调,差异有统计学意义[si-RNA组（0.146±0.009）对比si-NC组（1.001±0.055）,t=15.566,P＆0.01]。经过缺氧复氧干预后L2细胞株si-IRF-8组Caspase-3、bax水平（1.877±0.250、1.989±0.145）较si-NC组（3.681±0.292、4.636±1.261）明显降低,差异有统计学意义（t=-4.686、-5.110,P＆0.01）,bcl-2水平在L2细胞的si-IRF-8组（0.837±0.858）较si-NC（0.179±0.533）组显著升高,差异有统计学意义（t=15.955,P＆0.01）;Western blot检测cleaved Caspase-3蛋白的表达水平（0.257±0.051）较质粒对照组（0.485±0.751）明显下调,差异有统计学意义（t=6.205,P＆0.01）。结论 IRF-8 si-RNA能特异性下调肺泡上皮细胞L2细胞株中IRF-8的表达,并显著降低缺氧复氧干预后细胞的凋亡水平,其机制可能与下调促凋亡相关蛋白bax、Caspase-3及上调抗凋亡相关蛋白bcl-2的转录过程相关。