下调长链非编码RNA-钾电压门控通道亚家族Q成员1反向转录物1表达逆转骨肉瘤细胞顺铂耐药的研究

摘要

目的 探讨长链非编码RNA钾电压门控通道亚家族Q成员1反向转录物1（KCNQ1OT1）在骨肉瘤顺铂（DDP）耐药发生中的作用及机制。方法 采用荧光定量聚合酶链反应（qPCR）方法检测KCNQ1OT1在亲代细胞及耐药细胞中表达。针对长链非编码RNA-KCNQ1OT1基因序列体外合成小干扰RNA（siRNA）,脂质体法将siRNA转染至人骨肉瘤细胞,采用WST-1检测两组细胞顺铂半数抑制浓度（IC50）,Transwell小室检测干扰KCNQ1OT1后对肿瘤迁徙及侵袭的影响情况,实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）检测上皮-间质转化（EMT）相关分子的表达。所有结果采用GraphPad Prism 7.0（GraphPad Software Inc,La Jolla,CA）及SPSS 22.0软件（SPSS,Chicago,IL,USA）处理。Student’st检验进行统计分析。结果 骨肉瘤顺铂耐药细胞MG63/DDP及143B/DDP的IC50值分别为（17.960±0.153）、（7.725±0.183） μmol/L,显著高于亲代细胞的IC50值[（5.074±0.159）、（2.633±0.219） μmol/L,t＝101.148、30.903,P＆0.01]。MG63顺铂耐药细胞株（MG63/DDP）和143B顺铂耐药细胞株（143B/DDP）中KCNQ1OT1的相对表达量分别为6.830±0.105、6.284±0.465,与亲代细胞比较（3.081±0.167,2.014±0.216）,差异有统计学意义（t＝22.917、11.722,P＆0.01）。干扰KCNQ1OT1表达后可抑制骨肉瘤细胞143B/DDP迁移及侵袭能力,WST-1检测干扰KCNQ1OT1后MG63/DDP及143B/DDP的IC50值分别为（8.363±0.089）、（3.947±0.093） μmol/L,与耐药细胞株比较,差异有统计学意义（t＝－93.911、－31.878,P＆0.01）。耐药细胞比较亲代细胞钙黏附蛋白E（E-cadherin）表达下调,钙黏附蛋白N（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、Slug表达上调,干扰KCNQ1OT1后,耐药细胞的E-cadherin表达上调,N-cadherin、Vimentin、Slug表达下调。结论 KCNQ1OT1可能通过调控EMT促进骨肉瘤耐药进程发生。