微小RNA-608在人骨髓间充质干细胞成骨与成脂肪分化动态平衡中的作用

摘要

目的 检测微小RNA（miRNA,miR）-608在人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）向成骨细胞和成脂肪细胞分化过程中的表达变化以及对hBMSCs向成骨细胞和成脂肪细胞分化的调控作用机制。方法 利用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）分别检测hBMSCs向成骨细胞以及成脂肪细胞分化过程中miR-608的表达变化。细胞计数试剂盒（CCK-8）和克隆形成实验检测miR-608对hBMSCs增殖的影响。利用生物信息学软件分析miR-608的靶基因。利用双荧光素酶报告基因检测miR-608与靶基因的结合。利用蛋白质印迹法（Western blot）检测miR-608对靶基因蛋白水平的表达变化。利用茜素红染色和油红O染色检测miR-608对hBMSCs向成骨细胞和成脂肪细胞分化的功能的影响。应用SPSS 17.0统计软件分析,数据以均值±标准差（Mean±SD）表示。两样本均数比较采用独立样本t检验,多样本均数比较采用单因素方差分析。结果 FQ-PCR检测显示在hBMSCs向成骨细胞分化第3天miR-608表达量下降,与对照组（1.00±0.11）比较,成骨诱导分化组（0.20±0.09）中miR-608的表达显著性降低,差异有统计学意义（t＝9.479,P＆0.01）。FQ-PCR检测发现在hBMSCs向成脂肪细胞分化第3天表达量升高,与对照组（1.00±0.09）比较,成骨诱导分化组（4.36±0.55）中miR-608的表达显著性降低,差异有统计学意义（t＝10.442,P＆0.05）。CCK-8和克隆形成实验检测发现miR-608抑制hBMSCs的增殖。生物信息学软件分析miR-608与Runt相关基因2（Runx2）以及音猬因子（SHH） 3’端非编码区（3’UTR）区有结合位点。双荧光素酶报告基因检测可见与miR-608 mimics NC组（1.00±0.22）比较,miR-608 mimcs组（0.21±0.11）荧光素酶活性显著降低,差异有统计学意义（t＝5.542,P＆0.05）。Western blot检测发现miR-608可以抑制Runx2和SHH蛋白水平的表达。茜素红染色检测显示较miR-608 mimics NC组（1.00±0.14）比较,miR-608 mimcs组（0.32±0.12）茜素红染色显著降低,差异有统计学意义（t＝6.387,P＆0.05）。油红O染色检测发现与miR-608 mimics NC组（19.20±2.34）比较,miR-608 mimcs组（32.12±6.25）油红O细胞阳性数目显著升高,差异有统计学意义（t＝3.353,P＆0.05）。结论 miR-608在hBMSCs向成骨细胞分化过程中表达降低,而向成脂肪细胞分化过程中升高。miR-608抑制hBMSCs的增殖。miR-608通过靶向Runx2和SHH mRNA 3’UTR区调控Runx2和SHH蛋白水平的表达。miR-608抑制hBMSCs向成骨细胞分化而促进hBMSCs向脂肪细胞分化。