可调控性人PTEN基因重组腺病毒的构建与表达

摘要

目的体外构建和表达可调控性人抑癌基因PTEN重组腺病毒.方法将人PTEN基因全长cDNA约1.4 kb经过穿梭载体,与可调控性腺病毒载体骨架连接,得到重组人PTEN基因腺病毒(Ad-PTEN),酶切与聚合酶链反应(PCR)鉴定后,在HEK293细胞包装、扩增,空斑试验测定病毒滴度,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法分别在mRNA、蛋白水平检测PTEN的表达.Ad-X-TRE-βgal病毒作为对照.结果构建的Ad-PTEN病毒滴度为1.8×107 pfu/ml,转染前列腺癌细胞株PC-3后RT-PCR扩增出特异条带(462 bp),Western blot检测PTEN蛋白(60×103)有高表达,对照病毒转染后未测到PTEN的表达.结论用体外连接法成功地构建了可调控性人抑癌基因PTEN重组腺病毒载体,并得到了正确、特异的表达.