缺血后处理对猪心肌细胞Fas基因蛋白表达及Caspase-3活性的影响

摘要

目的探讨缺血后处理对猪心肌细胞Fas基因蛋白表达及Caspase-3活性的影响。方法24只小型约克猪（体重35～40kg）被随机分为4组。组1（ACC组,n=6）：于CPB开始后并行循环45 min,阻断主动脉90 min,开放主动脉后心脏再灌注120 min；组2（pre-con组,n=6）：升主动脉阻断前进行心脏缺血预处理（阻断升主动脉5 min、开放10 min,重复3次）,余处理与组1相同；组3（post-con组,n=6）：并行循环45 min,阻断主动脉90 min,开放主动脉后心脏再灌注120 min；再灌注开始进行缺血后处理（阻断升主动脉30 s后开放30 s,重复3次,共3 min）；组4（pre-con +post-con组,n=6）：升主动脉阻断前进行心脏缺血预处理（阻断升主动脉5 min、开放10 min,重复3次）,阻断主动脉90 min,开放主动脉心脏再灌注120 min,再灌注开始进行心肌缺血后处理（阻断升主动脉30 s、开放30 s,重复3次共3 min）。在再灌注结束后取左心室全层心肌适量并固定。用原位化学法（TUNEL）观察各组心肌细胞凋亡,流式细胞法检测Fas基因蛋白表达及Caspase-3的活性。在CPB前、缺血90 min、再灌注30、60、120 min采静脉血检测血MDA、SOD水平。结果原位化学法测得心肌细胞凋亡率组2（10．46±0．91）%、组3（9．68±0．59）%和组4（11．35±1．37）%显著低于组1（19．75±1．81）%（P＜0．05）；流式细胞法测得Fas,Caspase-3荧光表达指数（FI）,组2（1．24±0．13和1．32±0．13）、组3（1．27±0．07和1．33±0．08）和组4（1．27±0．14和1．31±0．12）显著低于组1（1．74±0．11和1．99±0．12）（P＜0．05）；与组1相比,MDA血浆浓度组2、组3和组4显著低于组1,而SOD浓度却显著高于组1（P＜0．05）。组2、组3和组4上述指标差异无统计学意义（P＞0．05）。结论Fas、Caspase-3表达改变参与了心肌细胞凋亡及缺血再灌注损伤过程；缺血后处理可以明显减少心肌细胞凋亡,抑制缺血再灌注损伤。心肌细胞凋亡的减少与Fas基因蛋白的下调、抑制Caspase-3活性及氧化应激有关；缺血后处理与缺血预处理相比可以同等程度的减少心肌细胞凋亡。本实验未观察到缺血预处理和缺血后处理的叠加作用。