RNA干扰技术抑制人肺腺癌细胞系A549血管内皮生长因子-165蛋白的表达

摘要

目的观察RNA干扰技术能否有效抑制人肺腺癌细胞系A549血管内皮生长因子（VEGF）-165蛋白的表达。方法体外合成3条VEGF-165序列特异性双链小RNA（shRNA）及1条阴性对照RNA,应用RNAiFectTMTransfection试剂盒转染细胞。Western blot法检测VEGF-165蛋白的表达,MTT及细胞计数法检测siRNA转染对细胞活性的影响。结果随时间延长,目的siRNA对VEGF165蛋白表达有不同程度的影响,干扰时间越长,效果越明显。自干扰后24 h起,各组VEGF165蛋白的表达差异有统计学意义（对照组相对灰度为0.96±0.27;干扰组24 h相对灰度为0.81±0.10;48 h:0.52±0.12;72 h:0.36±0.10,P＜0.05）。噻唑蓝（MTT）比色法检测表明不同浓度siRNA及RNAiFect Reagent对细胞生长均无明显的抑制作用,与对照组之间差异无统计学意义（对照组:0.329±0.013;干扰组为0.329±0.017～0.357±0.042,P＞0.05）。细胞计数法检测表明不同浓度siRNA及RNAiFect Reagent对细胞生长增殖无明显影响。细胞与对照组之间差异无统计学意义（24 h:对照组1.56±0.11;干扰组1.47±0.12。72 h:对照组4.38±0.38;干扰组4.61±0.41,P＞0.05）。结论siRNA可以有效抑制人肺腺癌细胞系A549 VEGF165蛋白的表达。