全反式维甲酸及三氧化二砷诱导肝癌细胞株HepG-2凋亡及与胞内钙相关性研究

摘要

目的观察不同浓度全反式维甲酸（ATRA）与三氧化二砷（As2O3）单独及联合作用于人肝癌细胞株:HepG-2细胞,检测其体外生长增殖抑制率、细胞凋亡率及细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的变化,探讨其诱导肝癌细胞凋亡可能机制。方法分别及联合应用不同浓度的ATRA（0.1、1.0、10.0μmol,/L）、As2O2（0.5、1.0、2.0μmol/L）处理HepG-2细胞,用噻唑蓝（MTT）法测定不同作用时间细胞增长抑制率;流式细胞仪（FCM）膜联蛋白V/碘化丙锭（Annexin V/PI）双染色法检测细胞凋亡率的变化;采用荧光探针技术（Fluo-3）,应用激光共聚焦显微镜,测定细胞内[Ca2+]i的变化。结果 ATRA、As2O3对人肝癌HepG-2细胞增殖有抑制作用,抑制率与药物浓度、作用时间呈正相关,联合用药优于单独用药;ATRA、As2O3能够诱导人肝癌细胞HepG-2的凋亡,随药物作用时间的延长、药物浓度的增高,细胞凋亡率逐渐增高,联合组更明显;作用时间为24、48 h时,细胞内Ca2+荧光强度与药物浓度、作用时间呈正相关,联合组荧光增强更明显,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）,而作用时间至72 h时,荧光强度又恢复至正常水平（P＞0.05）。结论 ATRA、As2O3能够诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡,其诱导凋亡分子机制可能与细胞内钙离子浓度变化有关;ATRA、As2O3体外联合应用有协同抗肝癌作用。