阻断核心岩藻糖基化修饰对小鼠前B细胞信号传导能力的影响

摘要

目的观察阻抑核心岩藻糖基化修饰对前B细胞信号传导的调节作用。方法利用逆转录病毒包装技术建立核心岩藻糖转移酶Fut8基因沉默前B细胞株（70Z/3-Fut8-RNAi细胞）。用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）及Western blot检测Fut8 mRNA、蛋白表达和细胞内信号分子的酪氨酸磷酸化水平。结果成功构建重组pSINsi-hU6-Fut8 siRNA质粒,逆转录病毒包装后病毒滴度可达2.1×10~5 CFU/ml。Real-time PCR及Western blot检测结果表明70Z/3-Fut8-RNAi细胞的Fut8基因和蛋白表达明显下降,蛋白表达水平下调70%~80%,mRNA水平下调70%~80%,以及pre-BCR介导的细胞信号传导,即CD79a及BTK磷酸化显著下降。结论成功构建70Z/3-Fut8-RNAi细胞株,Fut8修饰的核心岩藻糖基化可能在早期B细胞的细胞信号传导过程中发挥重要的调节作用。