乙肝病毒核心启动子A1762T/G1764A/T1753A/T1768A突变对细胞细胞核增殖抗原、核因子-κB和p21表达的影响

摘要

目的通过基因合成A1762T/G1764A/T1753A/T1768A联合突变后的核心启动子,再以慢病毒感染的方式转染L-02细胞株,观察细胞内细胞核增殖抗原（Ki-67）、核因子-κB（NF-κB）和p21表达的变化。方法通过基因合成的方法,合成A1762T/G1764A/T1753A/T1768A联合突变后的核心启动子,在N末端加上乙型肝炎病毒X蛋白（HBX）-Flag标记序列,分别双酶切pLenO-RTP载体和pUC57-CM-HBX,纯化酶切产物后进行定向连接,得到重组质粒pLenO-RTP-CM-HBX。钙转法将重组质粒转入293T细胞进行病毒包装然后转染L-02细胞株。Western blot法检测HBX-Flag在慢病毒感染后L-02中的表达以及转染后细胞内Ki-67、NF-κB、p21的表达。结果构建pLenO-RTP-CM-HBX核心启动子慢病毒载体可以效率较高地感染L-02细胞株（＞95%）,并在细胞内转录、翻译、合成HBX-Flag。突变组Ki-67、NF-κB、p21的相对表达水平分别为2.103±0.346、2.201±0.486、0.771±0.338,空载组为0.221±0.016、0.232±0.117、2.032±0.215,空白对照组为0.323±0.017、0.334±0.207、2.141±0.305。同空载组和空白对照组比较,突变组Ki-67、NF-κB表达增加,p21表达降低（P＜0.05）。而空载组和空白对照组的各指标差异无统计学意义（P＞0.05）。结论乙肝病毒核心启动子联合突变可影响细胞内Ki-67、NF-κB和p21的表达。