放射性人胚肺成纤维细胞增殖模型的建立

摘要

目的 通过观察辐射对人胚肺成纤维细胞(HELF)增殖活性的影响,建立放射性HELF增殖模型.方法 HELF于培养瓶中传代培养后,首先进行照射剂量筛选,采用6MV-X线,分为0、5、10、12、15、18、20 Gy不同剂量照射组进行照射,培养时间48 h,噻唑蓝(MTF)比色法观察不同剂量照射对HELF增殖的影响.根据增殖高峰剂量,进一步间隔1 Gy筛选造成细胞增殖的最佳照射剂量.第二步进行培养时间筛选,采用造成细胞增殖的最佳照射剂量,培养时间分别为24、48、72 h,筛选出造成细胞增殖的最佳时间.第三步通过检测照射后HELF中Ⅰ、Ⅲ型前胶原含量,进一步确定最佳培养时间,验证模型成功与否.结果 在1 ～ 15 Gy范围内,X线能够促进HELF的增殖,其中5 Gy剂量组增殖活力最强,吸光度(A)值达到0.65 ±0.04,与空白对照组及其他照射组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).以5 Gy对HELF进行照射后,24、48、72 h的A值分别为0.38±0.04、0.59±0.02、0.74±0.03,48、72 h与24 h时间点比较,其增殖活性更强,差异有统计学意义(P＜0.05).采用5 Gy照射后培养24、48、72 h,相应时间点照射组中Ⅰ型前胶原表达含量分别是空白对照组的2.54、2.69和3.75倍,差异有统计学意义(P＜0.05).Ⅲ型前胶原表达含量分别是空白对照组的1.52、2.18和3.14倍,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 X线能够促进HELF的增殖,其中5 Gy剂量组HELF增殖活力最强.在5 Gy照射后培养72 h条件下,可以制作放射性HELF增殖模型.