血清淀粉样蛋白A在刀豆球蛋白A诱导肝损伤中的作用

摘要

目的研究血清淀粉样蛋白A（Saa）在刀豆球蛋白A（ConA）诱导的肝损伤过程中发挥的作用及其机制。方法通过注射ConA于Saa转基因过表达小鼠（TG）和野生型小鼠（WT）建立肝损伤模型;实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测TG小鼠肝脏组织中单核细胞趋化蛋白-1（MCP1）、趋化因子1α（MIP1α）、趋化因子1β（MIP1β）、趋化因子IP10（IP10）和嗜酸性粒细胞趋化蛋白（Eotaxin）基因表达;分别测定两组小鼠血清中谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）的浓度;酶联免疫反应（ELISA）测定小鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）浓度;Western blot法测定小鼠肝脏组织中Saa、磷酸化核因子α抑制蛋白[p-IκBα（Ser32/36）]和核因子α抑制蛋白（IκBα）的表达;运用免疫磁珠法分离纯化小鼠肝脏、脾脏中CD4+T细胞并进行流式细胞术检测。结果 TG小鼠肝脏组织中MCP1、MIP1α、MIP1β、IP10、Eotaxin基因表达量（0.61±0.13、0.89±0.15、0.76±0.12、0.37±0.08、0.98±0.17）显著高于WT组（0.13±0.03、0.27±0.02、0.16±0.06、0.07±0.02、0.34±0.07）（P值分别为0.001、0.001、0.001、0.021、0.001）;6 h时TG小鼠肝脏组织中ALT和AST浓度分别为（16.2±3.1）U/L和（18.8±4.2）U/L,显著高于WT组（6.1±1.3）U/L和（4.5±1.4）U/L（P值分别为0.002、0.001）;血清中TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-8的浓度[（813.6±114.2）、（64.5±8.9）、（1 045.8±138.6）、（43.4±5.5）pg/ml]显著高于WT组[（253.1±33.5）、（10.5±6.7）、（374.1±53.7）、（24.8±3.4）pg/ml]（P值分别为0.011、0.006、0.005、0.014）;流式细胞术显示,TG小鼠肝脏中CD4+T细胞和F4/80+CD11b+巨噬细胞比例分别为（60.72±3.65）%和（9.86±0.58）%,显著高于WT组小鼠（35.41±2.45）%和（2.73±0.51）%（P值分别为0.011、0.014）。Western blot显示TG小鼠肝脏组织中p-IκBα（Ser32/36）水平升高,而Toll样受体2抑制剂（CU-CPT22）作用后p-IκBα（Ser32/36）水平降低。结论 Saa过表达通过诱导趋化因子的表达促进肝损伤的发生,具有Toll样受体（TLR2）活性依赖关系,并通过增加CD4+T细胞和巨噬细胞数量发挥作用。