微小RNA-200c对膀胱癌T24细胞增殖和细胞周期的影响

摘要

目的观察微小RNA-200c（miR-200c）对膀胱癌细胞,T24增殖和细胞周期的影响并探讨其机制。方法运用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）技术检测膀胱癌5个细胞株中miR-200c的表达水平。借助细胞转染技术,将miR-200c模拟物（mimics）及无义对照序列转染处于对数生长期的膀胱癌T24细胞,分别构建miR-200c过表达（MU组）及阴性对照组（NC组）,并通过Real-time PCR技术进行验证转染效率。用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测两组细胞转染24、48及72 h的细胞增殖率,流式细胞术观察细胞周期分布变化,Western blot法检测细胞周期相关蛋白表达水平的变化。结果 （1）miR-200c在膀胱癌细胞株EJ（13.204±0.946）、T24（18.259±0.776）、253J（8.333±0.543）、5637（6.594±0.326）、RT4（11.348±0.513）中表达量均显著高于正常尿路上皮细胞SV-Huc（1.053±0.078）,差异有统计学意义（P=0.000）。（2）MU组在转染miR-200c mimics48、72h后吸光度值（1.485±0.131、2.396±0.110）均显著高于NC组（1.158±0.182、1.893±0.216）,差异有统计学意义（P=0.050、0.023）。（3）与NC组比较,MU组细胞周期分布G1期比例下降[（54.65±0.60）%比（64.51±0.63）%,P=0.004],S期比例上升[（31.43±0.77）%比（27.99±0.53）%,P=0.034],G1/S比值下降（1.74±0.06比2.31±0.07=0.013）。（4）转染miR-200c后细胞周期蛋白依赖激酶（CDK）2（1.44±0.10比0.86±0.15,P=0.005）、CDK4（3.05±0.17比1.24±0.07,P=0.001）、E2F3（1.81±0.22比1.18±0.20,P=0.021）表达水平均升高。结论 miR-200c通过调控细胞周期相关蛋白促使膀胱癌,T24细胞周期由G1向S期转变,从而促进膀胱癌细胞增殖。