人脐带血浆纤维蛋白溶解酶原的纯化及其诱导玻璃体后脱离的研究

摘要

背景近年来关于药物性玻璃体溶解的研究已陆续开展，主要包括软骨素酶、透明质酸酶、分散酶和纤维蛋白溶解酶等几大酶类，有些已应用于临床试验。然而对源于人脐带血浆的纤维蛋白溶解酶用于实验性诱导动物眼玻璃体后脱离（PVD）的研究尚未见报道。目的从人脐带血血浆中实现有活性的纤维蛋白溶解酶原的提取及纯化，并探讨其在诱导PVD方面的初步作用。方法利用低温醇沉液相分离法从人脐带血血浆中获得较纯的纤维蛋白溶解酶原（Pig）并进行活性测定。取新鲜离体猪眼25只，分为5组。第一组作为正常对照，第二组每只眼玻璃体腔注入0．1ml平衡盐溶液（BSS），第三组每只眼注入0．1ml含1000Ixmol／（min·L）的重组链激酶（r-sK），第四组每只眼注入0．1ml含1000tzmol／（min·L）的r—sK联合0．1ml含3μmol／（min·L）的Plg（r—SK＋Plg），第五组每只眼注入0．1ml1000μmol／（min·L）的r—sK联合0．1ml3~mol／（min·L）的人纤维蛋白溶解酶原标准品（r—SK＋Plg标准品），各组药物均经睫状体平坦部注射，37℃孵育60min后常规固定，在光学显微镜、扫描电子显微镜和透射电子显微镜下进行视网膜形态学和超微结构观察。结果成功从人脐带血血浆中获得了纤维蛋白溶解酶原的分离及提取，初步纯化后获得有潜在纤溶活性的纤维蛋白溶解酶原。动物实验发现正常对照组、BSS组及r—SK组均未见PVD。除r—SK＋Pig标准品组外，r—SK＋PIg组的猪眼后极部发生PVD，视网膜内界膜表面较光滑，光学显微镜及电镜下视网膜的组织结构和细胞结构均未见异常。结论纤维蛋白溶解酶原能够通过低温醇沉联合液相分离方法从人脐带血血浆中获得并且具有潜在纤维蛋白溶解活性。1000μmol／（min·L）r—SK与3μmol／（min·L）Plg联合注入离体猪眼玻璃体腔60min可以诱发后极部PVD，对视网膜未见毒性作用。