Th1、Th17细胞对小鼠视网膜星形细胞的杀伤作用

摘要

背景C57BL／6及B10Rm小鼠是实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）动物模型常用的小鼠种系，其中C57BL／6小鼠免疫后眼部炎症较轻，而B10Rm小鼠免疫后眼部表现为典型的后葡萄膜炎病理改变。目的观察培养的光感受器间维生素A类结合蛋白（IRBP）抗原特异性Th1、Th17细胞对小鼠视网膜星形细胞的杀伤作用，研究EAU中Th1及Th17细胞的致病机制。方法选取C57BL／6小鼠、B10Rm小鼠各10只，尾根部及躯干皮下注射200Ix1含有200μgIRBP1—20或IRBP161—180抗原及完全弗氏佐剂（CFA）的乳化液，共均匀注射6个点以免疫动物。流式细胞仪分析B10Rm小鼠模型的眼内浸润T细胞类别。分离培养C57BL／6小鼠淋巴结及脾脏IRBP特异性T细胞，分别加入白细胞介素2（IL-2）或IL-23以适于Th1、Th17细胞生长。将培养至第5天的Th1、Th17细胞分别加入到经干扰素-1（IFN-1）预处理的单层视网膜星形细胞中，观察细胞间的相互作用，检测肿瘤坏死因子-α（TNF—α）的质量浓度。结果B10R111小鼠EAU模型眼球中有大量炎性细胞浸润，流式细胞仪检测证实含有IFN-γ＋、IL-17＋细胞和CD45＋细胞，分别占9．5％、5．1％和41．4％。IRBP1—20刺激后6d，含IL-2和IL-23培养基中IFN-γ＋细胞分别为44．0％、8．0％，IL17＋细胞分别为1．O％、26．O％。Th1、Th17与视网膜星形细胞相互作用24h后，可见视网膜星形细胞死亡脱落，Th17较Th1具有更强的杀伤作用。Th1、Th17细胞分别与星形细胞共培养48h，两种培养基中TNF—Ot的质量浓度分别为（500±10）、（801±24）μg／L，差异有统计学意义（t=-20．36，P=0．00）。结论Th1、Th17对视网膜星形细胞均有杀伤作用，Th17细胞杀伤作用更强，在葡萄膜炎致病过程中发挥更重要的作用。杀伤过程中既有细胞直接接触作用，又有通过细胞因子介导的间接作用。