枸杞多糖对人视网膜色素上皮细胞抗衰老作用的影响

摘要

背景 年龄相关性黄斑变性（AMD）的发病与视网膜色素上皮（RPE）细胞的衰老有关,寻求抗RPE细胞衰老的药物对AMD的防治有重要意义.研究表明枸杞多糖（LBP）有延缓衰老的作用,但其对RPE细胞衰老的作用机制尚不完全明确. 目的 研究LBP对体外培养的人RPE细胞的吞噬功能、清除脂褐素的功能及细胞增生活性的影响,探讨LBP防治AMD的可行性.方法 分离猪视网膜神经上皮层,密度梯度离心法提取猪眼光感受器外节（POS）,并用异硫氰酸荧光素（FITC）标记,然后分别加入含0.01、0.10、1.00 g/LLBP的人RPE中培养24 h,荧光显微镜下测量正常对照组、POS对照组及各质量浓度LBP＋POS组人RPE细胞吞噬POS的荧光面积,评估LBP对人RPE细胞吞噬功能的影响.将密度为5×104个/ml的人RPE细胞与猪POS混合培养3周以建立POS诱导的脂褐素模型,然后将模型细胞分别加入含上述质量浓度LBP的培养液中,用流式细胞术定量检测人RPE细胞内脂褐素的自发荧光值（A）,观察LBP对人RPE细胞清除脂褐素功能的影响.对脂褐素化的人RPE细胞进行培养后分别加入含有上述不同质量浓度LBP的培养液,采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法测定培养24、48和72 h后各组细胞生长的增生值（A）. 结果 光学显微镜下可见猪POS呈大小均一、排列整齐、独立的细杆状形态,透射电子显微镜下可见双层膜盘样结构,荧光显微镜下可见FITC标记后呈黄绿色荧光.正常对照组未发现人RPE细胞对猪POS的吞噬,但随着LBP质量浓度的增加,RPE细胞对猪POS的吞噬面积逐渐增加,差异有统计学意义（F=21.425,P=0.006）.与POS对照组比较,不同质量浓度LBP＋POS组人RPE细胞对猪POS的吞噬面积均增加,差异均有统计学意义（P＜0.01）.流式细胞术检测结果表明,正常对照组RPE细胞中脂褐素荧光值非常低,RPE细胞与POS共培养后细胞中脂褐素荧光值明显增加,不同质量浓度的LBP作用后,RPE细胞内脂褐素自发荧光值逐渐下降,均低于POS对照组,差异均有统计学意义（P＜0.01）,其中1.00 g/L LBP＋POS组RPE细胞内脂褐素自发荧光值最低,LBP对脂褐素的清除能力最强.LBP干预人RPE细胞24、48、72 h,正常RPE细胞组的细胞增生值（A）均最高,脂褐素化RPE细胞组A值最低,随着LBP质量浓度的增加,各质量浓度LBP＋脂褐素化RPE细胞组A值逐渐增加,各时间点1.00 g/L LBP＋脂褐素化RPE组A值接近正常RPE细胞组,差异均无统计学意义（P＞0.05）.结论 LBP能增强人RPE细胞的抗衰老作用,其作用机制与增强人RPE细胞吞噬POS、清除脂褐素的功能及细胞增生活性有关.