人疱疹病毒6型三重芯片式数字PCR方法的建立

摘要

目的 建立同时检测疱疹病毒(human herpesvirus,HHV)-6A、B和核糖核酸酶P/MRP 30 kDa 亚基(RPP30)的三重芯片式数字 PCR(chip digital PCR,cdPCR)方法确定 HHV-6A 与 HHV-6B感染的病毒载量,及高病毒载量的HHV-6是否由病毒整合到染色体导致.方法 根据已建立的HHV-6A、HHV-6B 实时荧光定量 PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)方法,建立HHV-6三重cdPCR方法.分别使用HHV-6A、HHV-6B病毒培养物进行敏感性检测,并与其他疱疹病毒进行特异性检测.随后,使用127份全血样本进行三重cdPCR方法验证.结果 HHV-6cdPCR与RT-qPCR方法检测结果的相关性良好(R2＞0.97),且与其他疱疹病毒无交叉反应.对经RT-qPCR与cdPCR检测均为阳性的14份样本,经三重cdPCR方法检测,得到HHV-6A和HHV-6B的最低检测病毒载量分别为50拷贝/ml和105拷贝/ml.并且14份样本中HHV-6病毒载量与(RPP30拷贝数/2)的比值均小于1.结论 建立的三重cdPCR具有较好的敏感性和特异性,且HHV-6三重cdPCR方法可以定量检测HHV-6A、HHV-6B的病毒载量以及RPP30的拷贝数.通过检测样本中HHV-6病毒载量与(RPP30拷贝数/2)的比值,可以确定高病毒载量的HHV-6是否存在染色体整合.