重组人tau441(P301S)蛋白表达纯化及生物学特性分析

摘要

目的 初步了解重组人tau441(P301S)蛋白体外聚集、抗原性及免疫原性等生物学性质.方法 原核表达带His标签的tau441(P301S)重组质粒,镍亲和层析纯化重组蛋白,BCA测定蛋白浓度,SDS-PAGE凝胶考马斯亮蓝染色确定蛋白的纯度;采用Western blot(WB)和负染透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)鉴定;间接酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测所得蛋白的抗原性;以重组蛋白免疫小鼠,检测免疫血清特异性抗体滴度来分析其免疫原性.结果 所得重组人tau441(P301S)纯度为70％,WB显示在相对分子质量(Mr.×103)64和更高相对分子质量处有特异性条带.TEM显示,tau441(P301S)呈絮状团块聚集,团状面积显著大于tau441野生型蛋白(t=6.439,P=0.003);4°C孵育9 d后,tau441(P301S)形成明显的纤维状结构.间接ELISA结果显示,tau441(P301S)能被tau单抗HT7(1∶80 000)识别;小鼠免疫血清tau特异性抗体滴度达到1∶128 000,且WB显示,免疫后血清识别阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)转基因小鼠脑裂解抽提物.结论 重组人tau441(P301S)蛋白具有体外聚集性增强的特性但其抗原性和免疫原性未改变.