一种筛选原核高效表达克隆的方法

摘要

外源基因大肠杆菌中的低表达往往与基因５；端核苷酸序列不利于翻译起始有关，未经修饰的ＧＭ－ＣＳＦ在大肠杆菌中表达量很低，我们选用ＧＭ－ＣＳＦ作为报道基因，在不改变氨基酸序列的前提下，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增，构建了两类包含５’端１０个密码子的简并序列库，为便于快速筛选高表达的克隆，构建了四环素抗体（ＴｅｔＲ）选择载体筛选系统，其基本原理是外源在因与ＴｅｔＲ基因串联，高表达的ＧＭ－ＣＳＦ５’端带