轮状病毒组特异性抗原VP6在重组腺病毒中的表达及其免疫学效果的研究

摘要

目的构建可表达A组轮状病毒组特异性抗原VP6的非复制型重组腺病毒载体,并对其生物学和免疫学性质进行研究.方法将人轮状病毒VP6基因插入腺病毒载体pShuttle-CMV中,通过细菌内同源重组方法获得重组腺病毒DNA,将其转染293细胞获得重组腺病毒.用聚合酶链反应(PCR)及Southern blot方法,检测目的基因在重组腺病毒中的整合,用Western blot检测VP6的表达.通过灌胃和滴鼻两种途径对小鼠进行免疫,并对免疫后小鼠体液和粘膜免疫进行分析.结果得到了重组腺病毒rvAd-VP6,VP6基因整合于腺病毒基因组中,在293细胞中可稳定表达.2次免疫后灌胃和滴鼻两组小鼠均产生明显免疫应答,血清IgG抗体滴度分别为1∶1 000和1∶10 000～1∶100 000.除了血清IgG外,小鼠还产生了较强的针对轮状病毒的血清IgA,滴度为1∶10～1∶100.滴鼻组在肺灌洗液和肠匀浆液中均可检测到分泌型IgA(sIgA),灌胃组仅在肠道检测到sIgA.滴鼻组的免疫学效果明显优于灌胃组.结论人轮状病毒VP6基因重组腺病毒载体的成功构建及所取得的良好免疫学效果,为我国具有自主知识产权的新型轮状病毒基因工程疫苗的研制奠定了基础.