SARS-CoV受体ACE-2基因的克隆及在真核细胞中的表达

摘要

目的克隆、真核表达严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)受体ACE-2基因,建立安全、可靠的SARS-CoV保护性体液免疫评价体系.方法采用Trizol一步法提取人右心衰心房组织总RNA,逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nested-PCR)扩增ACE-2全长基因,克隆人pcDNA4/HisMax-TOPO表达载体,重组质粒转染293 T细胞进行瞬时表达,Western Blot检测其真核表达;建立细胞融合抑制实验以检测SARS-CoV中和抗体,并与SARS-CoV假病毒中和试验进行平行比较.结果重组质粒可在真核细胞中表达ACE-2蛋白,其蛋白表达细胞可与S蛋白表达细胞产生细胞融合现象,并可用于中和抗体的检测;其结果与SARS-CoV假病毒中和试验较为一致.结论克隆和真核表达了SARS-CoV受体ACE-2基因;基于其蛋白真核表达的细胞融合抑制实验可用于SARS-CoV中和抗体的检测.