悬浮培养昆虫细胞表达重组HPV16 L1蛋白

摘要

目的 用悬浮培养昆虫细胞方式表达人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白,为获得病毒样颗粒(VLPs)及进一步深入研究疫苗和诊断试剂盒打基础.方法 优化昆虫细胞Sf9的悬浮培养条件;优化扩增病毒和蛋白的条件;空斑试验测定病毒滴度;SDS-PAGE和Western Blot分析目的蛋白的表达情况;透射电镜观察细胞内HPV16 L1蛋白形成的VLPs.结果 优化后,悬浮培养昆虫细胞初始接种密度为5×105cell/ml,以MOI(Multiplicity ofInfection)=10接种重组病毒rBacV/HPV16 L1,72～84h收获细胞沉淀为最佳.经透射电镜观察,在重组病毒感染的昆虫细胞内,存在HPV16L1蛋白形成的VLPs.结论 优化了细胞悬浮培养、病毒扩增和蛋白表达的条件;电镜观察在重组病毒rBacV/HPV16L1感染的昆虫细胞中,HPV16 L1蛋白可形成VLPs.