乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体的构建及鉴定

摘要

目的构建乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体,为进一步研究以乙脑病毒为载体的新型疫苗奠定基础。方法（1）构建了两个乙脑病毒复制子:一个为完全缺失PrM/E基因（命名为FullΔprM/E Replicon）;一个保留E基因C端213bp（命名为Partial ΔprM/E Replicon）,并代之以多克隆位点。（2）将复制子RNA转染BHK-21细胞,于24、48、72、96h采用Real-time PCR验证复制子的自主复制能力。（3）于复制子多克隆位点处插入YFP报告基因,并将含报告基因的复制子RNA转染BHK-21细胞,采用荧光显微镜观察及流式细胞仪检测验证YFP的表达。结果（1）两个复制子RNA转染BHK-21细胞后,RNA有随时间增加而不断增多的趋势。（2）含报告基因的复制子RNA转染BHK-21细胞后,荧光信号持续增强,表达YFP的阳性细胞率也逐渐增多。结论构建的乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体Full ΔprM/E Replicon及Partial ΔprM/E Replicon具有自主复制能力及对外源蛋白的表达能力。