丙型肝炎病毒5′端非编码区结构域Ⅱ在其翻译启动活性中的作用

摘要

目的分析丙型肝炎病毒（HCV）5′端非编码区（NCR）的结构域Ⅱ序列（nt44-118）在其翻译启动活性中的作用。方法用PCR扩增技术获得缺失5′端118nt的截短型HCV5′NCR片段,并以之替换萤火虫荧光素酶（Fluc）真核表达质粒pCMVNCRluc中的完整HCV5′NCR,构建截短型HCV5′NCR调控Fluc基因表达的真核表达质粒pCNl-d3。将pCNl-d3、pCMVNCRluc和pCMVNCRluc缺失HCV5′NCRnt1-43后的重组质粒pCNl-d2以脂质体方法分别转染人肝癌细胞株HepG2,用双荧光素酶报告基因检测系统检测Fluc相对表达活性,RT-PCR检测Fluc mRNA的相对表达水平。结果酶切和测序结果表明,重组质粒构建成功。各质粒转染细胞后Fluc mRNA的相对表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）;pCNl-d2表达的荧光素酶活性与pCMVNCRluc差异无统计学意义（P＞0.05）,pCNl-d3的Fluc活性显著低于pCMVNCRluc（P＜0.01）。结论HCV5′NCR的结构域Ⅱ（nt44-118）含有其发挥翻译启动功能的重要序列。